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LAMP(loop-mediated isothermal amplification),即环介导等温扩增法,是一种新型的核酸扩增方法,其特点是针对靶基因的6个区域设计4种特异引物,在链置换DNA聚合酶(Bst DNA polymerase)的作用下,60-65℃恒温扩增,15-60分钟左右即可实现10^9~10^10倍的核酸扩增,具有操作简单、特异性强、产物易检测等特点。

在DNA合成时,从脱氧核糖核酸三磷酸底物(dNTPs)中析出的焦磷酸离子与反应溶液中的镁离子反应,产生大量焦磷酸镁沉淀,呈现白色。因此,可以把浑浊度作为反应的指标,只用肉眼观察白色浑浊沉淀,就能鉴定扩增与否,而不需要繁琐的电泳和紫外观察。由于环介导等温扩增反应不需要PCR仪和昂贵的试剂,有着广泛的应用前景。

LAMP 技术虽然是一种新的核酸扩增技术,但其在分子生物学检测领域的应用非常广泛,相对于现有的其他核酸扩增技术, LAMP 具有许多独特的优点:

(1)LAMP 技术可以在等温条件下实现扩增,不需要进行模板的预变性,减少了PCR 技术升降温带来的影响以及对昂贵、精密实验仪器的要求,同时扩增效率高,可以在1 h 内把几拷贝的目的序列迅速扩增到10^10 拷贝;

(2)LAMP 技术分别使用一对外部引物和一对内部引物,可以识别目的序列上6个不同的区域,对目的序列具有高度的选择性,减少了非靶标序列的影响,因此扩增的特异性非常高;

(3)阳性扩增反应中会产生大量的类似花椰菜结构的产物和白色焦磷酸续沉淀,扩增产物的检测方法多样,可用凝胶电泳检测、直接用肉眼检测或在反应体系中加人染料,根据颜色的变化进行检测,还可以利用浊度仪,根据扩增产物混浊度的不同对原始核酸分子进行实时定量分析。此外,对于某些病原体可直接利用简单处理的样本作为模板,省略繁琐的DNA/RNA 提取步骤。

综上所述, LAMP 技术因其快速、高效、特异、灵敏和经济等优点,已经应用于病原菌、寄生虫、病毒、疾病和转基因产品检测等领域,并且还将广泛应用于临床诊断、环境监测、食源安全等领域,具有更为广阔的发展应用前景。