1、取瓶内干粉32.8g溶于1000mL去离子水的洁净三角瓶中，充分搅拌混匀。也可根据需要按照32.8 g/L的比例扩大或缩小制备培养基的量。

2、加热至100℃，不停搅拌，使其完全溶解。切勿加热超过100℃，切勿121℃高压灭菌。若使用微波炉加热，应将培养基加热沸腾，立即移出，轻轻摇匀，再放入微波炉加热，观察小气泡变为大气泡，直至完全溶解即可。切勿使培养基溢出。

3、加热后的培养基冷却至48℃，轻轻地摇动均匀，倾注平皿，使其凝固，晾干备用。

该成品平板在室温可保存一天或在冰箱内贮存2周（2℃~8℃，避光）。

接种以下菌株于该培养基平板上，在36±1℃恒温条件下有氧培养18~24h。

对大肠杆菌灵敏度为97%（Ogden et al. 1991）。罕见的β-葡萄糖醛酸酶阴性大肠杆菌（如：大肠杆菌O157）可能出现假阴性结果，如果主要研究病原菌如大肠杆菌O157，可选用科玛嘉大肠杆菌O157显色培养基。若研究主要研究总大肠菌群，哈夫尼菌属出现假阴性结果，为无色菌落。

使用过的培养基需要在121℃灭菌至少20分钟才可以按照有关规定丢弃。

附：供体外诊断使用，产品须专业人员操作。