超螺旋

细胞转染效率受多种因素影响，主要因素有下面几个： 不同细胞系转染效率通常不同，但细胞系的选择通常是根据实验的需要，因此在转染实验前应根据实验要求和细胞特性选择适合的转染试剂。每种转染试剂都会提供一些已经成功转染的细胞株列表和文献，通过这些资料可选择最适合实验设计的转染试剂。当然，最适合的是高效、低毒的转染试剂，如Entranster试剂

怎样做好DNA转染实验？ 我认为，要想做好质粒DNA细胞转染实验，应注意以下几点： 线性化还是超螺旋会影响转染结果：超螺旋质粒的转染效率比线性DNA高得多，特别是瞬时转染。而线性化DNA转染的整合几率高。质粒太大了转染会困难一些

从细胞裂解物中除去核酸（降低粘度）以利于纯化和制备蛋白。 从全细胞裂解液中改进蛋白质的分离电泳和色谱分离。 OmniCleave™核酸内切酶是来自大肠杆菌高度纯化的重组酶，可降解单链和双链DNA和RNA，以及二，三，四核苷酸如（图1）

细胞转染效率受多种因素影响，主要因素有下面几个： 不同细胞系转染效率通常不同，但细胞系的选择通常是根据实验的需要，因此在转染实验前应根据实验要求和细胞特性选择适合的转染试剂。每种转染试剂都会提供一些已经成功转染的细胞株列表和文献，通过这些资料可选择最适合实验设计的转染试剂。当然，最适合的是高效、低毒的转染试剂，如Entranster试剂

技术支持Technical Support THP-1细胞因其特性，本身就很难转染，所以转染效率普遍偏低。但转染效率太低容易影响后续实验的进行，那么我们可以如何提高转染效率呢？ 目前实验中THP-1转染使用较多的方法是：脂质体转染、腺病毒转染、慢病毒转染，其中病毒转染效率相较脂质体转染要高一些，但操作更繁琐、成本也更高。 脂质体转染成本低廉，但细胞毒性较大，细胞死亡率较高； 腺病毒转染可在对细胞损伤较小的情况下达较高水平，但可能对细胞免疫状态影响大； 慢病毒转染细胞毒性低，但其病毒产量低，实验消耗病毒量大

微环DNA是传统质粒在大肠杆菌中通过位点特异性重组得到的一种新颖的小环超螺旋表达框，其缺乏抗性标记基因、复制原点等细菌序列，从而增强了在临床上的安全性。由于微环中去除了质粒中包含的固有的载体骨架，从而避免了因骨架与表达基因的共价连接，导致的表达沉默 (即普通质粒在转染、DNA疫苗制备、病毒或抗体生产、临床前动物实验中经常由于不能持久且稳定的表达而限制应用)。大量体内、外实验表明，微环DNA具有表达时间长、表达效率高等特点