三氟乙酸(TFA)是一种强酸,常用于从固相树脂中裂解合成的多肽,也可用于提高多肽纯化步骤中的HPLC性能。默认情况下,定制的多肽是以冻干的TFA盐的形式交付的,其中TFA的含量可能高达10-45%。
定制多肽中的TFA可能会导致后续检测数据出现无法解释的差异。例如,nM浓度的TFA已被证明会干扰细胞实验,在某些情况下会抑制细胞增殖,而在其他情况下会增加细胞活力。
干品多肽的重量中不仅仅包含多肽,还包含有一些非肽的组份,如水、被吸收的溶剂、配位离子和盐等。肽的净含量是指肽在其中的重量百分比,这个百分比的数值范围很大,可能从50%到90%,取决于纯度、序列以及合成和纯化的方法,不要将肽的净含量和肽的纯度混为一谈,他们是两个完全不同的概念。纯度通常是通过HPLC测定的。纯度定义的是多肽样品中含正确序列的组分的百分比,而肽的净含量是指样品中肽类物质相对于总物质所占的百分比,肽的净含量通常是氨基酸组分分析或紫外分光法测定的,这个信息主要是在一些对肽的浓度很敏感的实验中,对计算肽的浓度是很重要的。
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