加入可溶性血小板内皮细胞粘附分子1(sPECAM-1/sCD31)再与 HRP 标记的可溶性血小板内皮细胞粘附分子1(sPECAM-1/sCD31)抗体结合，形成抗体抗原酶标抗体复合物，经过*洗涤后加底物 TMB 显色。TMB 在 HRP 酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成Z终的黄色。颜色的深浅和样品中的可溶性血小板内皮细胞粘附分子1(sPECAM-1/sCD31)呈正相关。用酶标仪在 450nm 波长下测定吸光度（OD 值），通过标准曲线计算 样品中大鼠可溶性血小板内皮细胞粘附分子1(sPECAM-1/sCD31)浓度。