bl21

Other Abstract 酮酸脱羧酶作为异戊醇生物合成的关键酶不存在于大肠杆菌中。以乳酸乳球菌的基因组DNA为模板经过PCR扩增得到酮酸脱羧酶基因kivD（rbs）插入到大肠杆菌高效表达载体pET-28a（＋）上形成pET-kivD（rbs）重组质粒热击转化进大肠杆菌 BL21（DE3） 中其成功表达了酮酸脱羧酶。对发酵产物进行分析检测到了微量的目标产物—异戊醇

内容：通过PCR从克隆载体pUC18-3Z/Cry2A*上扩增水稻偏爱型密码子优化的抗虫基因cry2A*经限制性内切酶NdeI和BamHI双酶切定向插入到原核表达载体pET-28a(+)成功构建了在表达蛋白的N端只带有6个组氨酸标签的融合蛋白表达载体pET-28a(+)/Cry2A*并转入大肠杆菌BL21(DE3)中。通过对其表达条件进行优化发现在IPTG浓度为0.05mmol/L、诱导时间为3h、诱导温度为20℃的表达条件下目的蛋白大部分以可溶形式进行表达。采用Ni-NTA亲和柱纯化得到高纯度目的蛋白薄层扫描分析蛋白纯度达到95%