血清,指血液凝固后,在血浆中除去纤维蛋白分离出的淡黄色透明液体或指纤维蛋白已被除去的血浆。其主要作用是提供基本营养物质、提供激素和各种生长因子、提供结合蛋白、提供促接触和伸展因子使细胞贴壁免受机械损伤、对培养中的细胞起到某些保护作用。
血清是由血浆去除纤维蛋白原而形成的一种很复杂的混合物,其组成成分虽大部分已知,但还有一部分尚不清楚,且血清组成及含量常随供血动物的性别、年龄、生理条件和营养条件不同而异。血清是血浆中不含纤维蛋白原的胶状液体具有维持血液的正常粘度、酸碱度、渗透压等作用。它主要由水和各种化学成分组成这些化学成分包括白蛋白、α1、α2、β、γ-球蛋白甘油三酯总胆固醇谷丙转氨酶等。血清中含有各种血浆蛋白、多肽、脂肪、碳水化合物、生长因子、激素、无机物等,这些物质对促进细胞生长或抑制生长活性是达到生理平衡的。对血清的成分和作用的研究虽有很大进展,但仍存在一些问题。主要是:
:血清的成分可能有几百种之多,目前对其准确的成分、含量及其作用机制仍不清楚,尤其是对其中一些多肽类生长因子、激素和脂类等尚未充分认识,这给研究工作带来许多困难;
第二:血清都是批量生产,各批量之间差异很大,而且血清保存期至多一年,因此,要保证每批血清的相似性极为困难,从而使实验的标准化和连续性受到限制;
第三:不能排除血清中含有易变物质,这被认为是“瓶中恶化”的原因之一。
血清的保存应该注意以下几点:
(1)需要长期保存的血清必须储存于-20℃ - 70℃ 低温冰箱中.4℃冰箱中保存时间切勿超过1个月.由于血清结冰时体积会增加约10%因此血清在冻入低温冰箱前必须预留一定体积空间否则易发生污染或玻璃瓶冻裂.
(2)热灭活是指56℃ 30分钟加热已完全解冻的血清.加热过程中须规则摇晃均匀.此热处理的目的是使血清中的补体成分(complement)灭活.除非必须一般不建议作此热处理因为热处理会造成血清沉淀物显著增多而且还会影响血清的质量.补体参与反应有:细胞毒作用 平滑肌细胞收缩 肥大细胞和血小板释放组胺 增强吞噬作用 促进淋巴细胞和巨噬细胞发生化学趋化和活化.
(3)瓶装血清解冻需采用逐步解冻法:-20℃ 至 -70℃ 低温冰箱中的血清放入4℃冰箱中溶解1天.然后移入室温待全部溶解后再分装.在溶解过程中需不断轻轻摇晃均匀(小心勿造成气泡)使温度与成分均一减少沉淀的发生.切勿直接将血清从-20℃进入37℃解冻这样因温度改变太大容易造成蛋白质凝集而出现沉淀.
(4)一般厂商提供的血清为无菌无需再过滤除菌.如发现血清有悬浮物则可将血清加入培养液内一起过滤切勿直接过滤血清.
(5)血清中的沉淀物 絮状物:主要是血清中的脂蛋白变性及解冻后血清中纤维蛋白造成这些絮状物不会影响血清本身的质量.可用离心3000rpm 5分钟去除也可不用处理. 显微镜下"小黑点":经过热处理过的血清沉淀物的形成会显著增多.有些沉淀物在显微镜下观察象"小黑点"常误认为血清受污染.一般情况下此小黑点不会影响细胞生长但如果怀疑血清质量则应立即停止使用更换另一批号的血清.