ECL鲁米诺化学发光试剂盒用于检测辣根过氧化物酶（HRP）标记的蛋白检测。在过氧化氢的存在下，辣根过氧化物酶催化发光液中的底物氧化并发光，此光可经X光-胶片感光记录下来。

1. 操作方便，使用前将溶液A和溶液B混合即可。

本试剂盒4°C运输，溶液A和溶液B都应存储于4°C，有效期为6个月。

1. 进行Western Blotting实验，常规电泳、转膜、孵育一抗，HRP标记二抗，洗膜，以下操作可在室温下进行。

2. 新鲜配制发光工作液，将溶液A和溶液B按1:1比例混合，例如1 ml溶液A与1ml溶液B混合即成工作液。

3. 将漂洗过的膜用吸水纸除去膜上多余的洗涤液，但不要使膜完全干燥，并将其转移至洁净的保鲜膜内，蛋白面朝上，用枪头将配制好的发光工作液均匀的涂抹在膜的表面。

4. 蛋白面朝上固定于X胶片暗盒中或成像仪中。

5. 暗房中进行曝光，可在暗房内放置红灯，先预曝光1 min，根据显影效果控制显影时间，定影1 min。根据预曝光效果确定曝光时间，以便得到较好的曝光图片。 成像仪按照仪器操作步骤，设置连续曝光时间，进行连续拍照。

6. 曝光后将定影的胶片取出，在自来水中轻轻漂洗，晾干后扫描图片，以便保存。 成像仪连续曝光后，取**的曝光图片作为最终结果。

2. 发光工作液要现配现用，且在强光下信号容易淬灭，因此配制后应避光保存。

3. 曝光时取适量的工作液，避免多余的发光液浸湿胶片，影响曝光效果。