1. 制造含10%DMSO或甘油、10～20%小牛血清的冻存培育液；

2. 取对数成长期的细胞，用胰蛋白酶把单层成长的细胞消化下来，悬浮成长的细胞则直接将细胞移至15ml离心管中、；

5. 将细胞分装入冻存管中，每管1～1.5 ml；

6. 在冻存管上标明细胞的称号，冻存时间及操作者；

1. 从液氮容器中取出冻存管，直接浸入37℃温水中，并不时摇动令其尽快消融。

2. 从37℃水浴中取出冻存管，打开盖子，用吸管吸出细胞悬液，加到离心管并滴加10倍以上培育液，混匀；

4. 弃去上清液，参加含10%小牛血清培育液重悬细胞，计数，调整细胞密度，接种培育瓶，37℃培育箱静置培育；

5. 次日更换一次培育液，持续培育。

1．从增殖期到构成细密的单层细胞曾经的培育细胞都可以用于冻存，但好为对数成长期细胞。在冻存前**好换一次培育液；

2．将冻存管放入液氮容器或从中取出时，要做好防护作业，避免**；

3．冻存和复苏好用新制造的培育液。