随机6核苷酸引物:是由随机碱基组成的寡核苷酸,通常由6个核苷酸组成,称为随机6聚体。该种引物不具备特异性,rRNA, tRNA,非编码RNA,小RNA,降解RNA,复杂二级结构的RNA等都可以作为其模板。该类引物可提高cDNA的产量和浓度,但是会使合成的cDNA长度变短。随机引物法的原理是随机引物(random primer)的寡核苷酸片段与单链DNA或变性的双链DNA随机互补结合(退火),以提供3’羟基端,在无5’→3’外切酶活性的DNA聚合酶(如Klenow片段)作用下,在引物的3’羟基末端逐个加上核苷酸直至下一个引物。当反应液中含有标记的核苷酸时,即形成标记的DNA探针。6个核苷酸混合物出现所有可能结合序列,引物与模板的结合以一种随机的方式发生,标记均匀跨越DNA全长。当以RNA为模板时,必须采用反转录酶,得到的产物是标记的单链cDNA探针。随机引物法标记的探针比活性高,但标记探针的产量比缺口平移法低。
随机6核苷酸引物 - 简书
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